想做一道新菜——先抄菜谱（目的基因），买齐食材与调料（构建载体），下锅烹饪（导入细胞），最后尝尝成色（检测鉴定）。基因工程的四步流程，跟这差不多。

前面我们设计了基因工程流程，要拿到目的基因就需要一台'分子复印机'——PCR。它能在试管里几小时内把指定的一段DNA放大几百万倍。

PCR 扩增出目的基因，限制酶在质粒上切出口子，两端带着可配对的粘性末端。但'配对'只是手拉手，要'缝合'成连续的DNA链，还得靠 DNA 连接酶。

前几页我们认识了PCR和DNA连接酶这些工具——但光有工具还不够，还要知道按什么顺序用、为什么这个顺序。就像有了刀和锅，还得知道先切菜还是先烧水。

流程已经搭好：先找到要用的遗传信息，再扩增、连接、导入并验证。这个“实验真正想拿到的特定基因”，就是目的基因。

Bt基因：定义、要点与典型应用

你可能听说过抗虫棉——棉花自己能杀死棉铃虫，农民因此少打很多农药。Bt基因进入植物后，真正发挥杀虫作用的，是它编码的那条蛋白质。

上一页我们说要用PCR来'特异性扩增'一段DNA——可怎么扩？想象你手里只有一根头发丝般的微量DNA，要研究它必须先'复印'到够用的量。PCR就是DNA的分子级复印机。

PCR 能把一段 DNA 在几小时内复制出上亿份，靠的不是一次性反应，而是把同样的三步反复执行几十次。我们把它拆开看——每一步在什么温度下、做什事、为什么缺一不可。

上一页PCR循环里，复性让双链DNA分开，准备延伸。但DNA聚合酶有个怪脾气——不会白手起家，必须有人先递上"起头"才能开工。这个"起头"就是引物。

• ✓基因工程四步骨架不可跳：目的基因→载体构建→导入受体→检测鉴定
• ✓PCR本质是热变性取代解旋酶，三步循环实现指数级特异性扩增
• ✓引物决定PCR产物的起止与特异性，二者缺一则产物不唯一
• ✓DNA连接酶只补磷酸二酯键，不补氢键，与解旋酶功能泾渭分明
• ✓Bt抗虫蛋白前体无毒，需经昆虫肠道蛋白酶切割才被激活为毒素

先合上书，给每个问题留两分钟独立思考，再对照参考答案——重点不在对错，而在你的思路是否清晰。